ELISA試劑盒實驗的一般步驟
ELISA試劑盒是繼免疫熒光和放射免疫技能之后發(fā)展起來的一種免疫酶技能。它是以免疫學(xué)反應(yīng)為根底,將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對底物的高效催化作用相結(jié)合起來的一種靈敏性很高的試驗技能。以下是對ELISA試驗的通用過程的簡略闡明。
ELISA試劑盒試驗通用過程:
(1)、要確保移液槍的精確性,誤差不能超過2%。可用水和電子天平進(jìn)行判定。如果有專業(yè)人員進(jìn)行糾正更好。
(2)、要裝備20ul、50ul、100ul、1000ul和排槍各一支。提取不相同的液體后,要更換槍頭。即使是提取規(guī)范品時也相同。要在試驗前1小時將試劑盒從冰箱中取出,使各種試劑都康復(fù)到室溫,以使作用更安穩(wěn)。
(3)、試驗時,要使底物避光儲存。
(4)、用槍提取液體時速度不能太快,防止生成氣泡而使提取量不精確。
(5)、提取液體時,要用量程和需要量附近的槍去吸,減小誤差數(shù)值。
(6)、將液體加到酶標(biāo)孔中時,防止槍頭和孔內(nèi)液體觸摸,可使槍頭上的液滴和孔壁觸摸,液滴會天然流下去。
(7)、液體悉數(shù)加完后,可將酶標(biāo)板在桌子上平行輕輕搖晃30秒,是液體平緩均勻。也可以用酶標(biāo)儀的晃動功用。
(8)、溫浴時,要用不干膠或膠帶紙封好酶標(biāo)板,防止水分的蒸騰。
(9)、洗板時,每次洗液參加后,應(yīng)靜置1分鐘,使清洗愈加完全。沒有洗板機(jī)時,倒去液體后,要將酶標(biāo)板在報紙或毛紙上用力拍干。
(10)、洗液不行時,可用蒸餾水自行制造PH7.4,0.02M的磷酸緩沖液,參加0.1%的吐溫20作為洗液。參加1/1000的疊氮鈉后可長時刻保存。
(11)、底物是光靈敏的,需要在臨用前現(xiàn)配。
(12)、檢測前,要翻開酶標(biāo)儀,使之穩(wěn)定10分鐘以上。
(13)、底物有必定的毒性,間斷液對皮膚有腐蝕性,應(yīng)盡量防止觸摸。
(14)、待檢樣品要弄清,否則會影響作用的精確性。
(15)、溫浴時刻應(yīng)遵從試劑盒規(guī)則。
(16)、應(yīng)盡量做雙孔試驗,這樣才調(diào)確保數(shù)據(jù)的精確性。
(17)、ELISA試劑盒對作用有疑問的樣品要用其它辦法進(jìn)行確證。